Розробка удосконаленої методики вилучення й очистки IgE людини

Скорочена інформація про документ
dc.contributor.authorГалкін, О. Ю.
dc.contributor.authorGalkin, O. Yu
dc.contributor.authorГалкин, А. Ю.
dc.date.accessioned2014-04-04T07:59:56Z
dc.date.available2014-04-04T07:59:56Z
dc.date.issued2013
dc.description.abstractenWe aim at creating and evaluating the acceptability of improved methods of isolation of high purity human IgE suitable for use in highly sensitive immuno-analytical methods. To this end, we generalize physicochemical and biological properties of immunoglobulins of different classes and analyze key methodological techniques used for isolation and purification of human IgE (ion-exchange chromatography on DEAE-cellulose, gel filtration on Sephadex G-200 and S-300 Sephacryl different options immunoaffinity chromatography). In addition, we justify circuit isolation and purification of human IgE based on own research data, as well as on other authors’ data. The technique is based on combination of the following methodological techniques: sequential removal of serum human IgG (by affinity chromatography on protein G), human IgA and IgM removal (using immunoaffinity chromatography based on sorbents with anti-IgA and anti-IgM monoclonal antibodies), allocation of human IgE by dual-gel filtration on Superdex 200. In addition, we perform the quality control of IgE by immunodiffusion for Ouhterloni and electrophoresis in polyacrylamide gel in reducing conditions. Using the proposed scheme, we obtain human IgE high purity. The human IgE output after all treatment phases is about 42 % of the initial amount of immunoglobulin E in the serum.uk
dc.description.abstractruЦелью работы было создание и оценка приемлемости усовершенствованной методики выделения IgE человека высокой степени чистоты, пригодного для применения в высокочувствительных иммуноаналитических методах. Для достижения поставленной цели, во-первых, было проведено обобщение физико-химических и биологических свойств иммуноглобулинов различных классов, и, во-вторых, был сделан анализ основных методологических приемов, применяемых для выделения и очистки IgE человека (ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе, гель-фильтрация на сефадексе G-200 и сефакриле S-300, различные варианты иммуноаффинной хроматографии. Обоснование схемы выделения и очистки IgE человека проведено с учетом как результатов собственных исследований, так и данных других авторов. Усовершенствованная методика основывается на использовании комбинации следующих методологических приемов: последовательное удаление из сыворотки IgG человека (с помощью аффинной хроматографии на протеине G), IgA и IgM человека (с помощью иммуноаффинной хроматографии на основе сорбентов с анти-IgA и анти-IgM моноклональными антителами), выделение IgE человека путем двухэтапной гельфильтрации на супердексе 200. Контроль качества полученного иммуноглобулина проводили в иммунодиффузии по Оухтерлони и электрофорезе в ПААГ в редуцирующих условиях. Использование предлагаемой схемы позволяет получать IgE человека высокой степени чистоты. Выход IgE человека после всех этапов очистки составил около 42 % от исходного количества иммуноглобулина Е в сыворотке крови.uk
dc.description.abstractukМетою роботи було створення та оцінювання прийнятності удосконаленої методики вилучення IgE людини високого ступеня чистоти, придатного для застосування у високочутливих імуноаналітичних методах. Для досягнення поставленої мети було, по-перше, проведено узагальнення фізико-хімічних та біологічних властивостей імуноглобулінів різних класів і, по-друге, виконано аналіз основних методологічних прийомів, що застосовуються для вилучення й очистки IgE людини (іонообмінна хроматографія на ДЕАЕ-целюлозі, гель-фільтрація на сефадексі G-200 та сефакрилі S-300, різні варіанти імуноафінної хроматографії). Обґрунтування схеми вилучення й очистки IgE людини проведено з урахуванням як результатів власних досліджень, так і даних інших авторів. Удосконалена методика ґрунтується на використанні комбінації таких методологічних прийомів: послідовне вилучення із сироватки IgG людини (за допомогою афінної хроматографії на протеїні G), IgA й IgM людини (за допомогою імуноафінної хроматографії на основі сорбентів із анти-IgA та анти-IgM моноклональними антитілами), вилучення IgE людини двохетапною гель-фільтрацію на супердексі 200. Контроль якості отриманого імуноглобуліну проводили в імунодифузії за Оухтерлоні та електрофорезі в ПААГ у редукуючих умовах. Використання запропонованої схеми дає можливість одержувати IgE людини високого ступеня чистоти. Вихід IgE людини після всіх етапів очистки становив близько 42 % від початкової кількості імуноглобуліну E в сироватці.uk
dc.format.pagerangeС. 18-23uk
dc.identifier.citationГалкін О. Ю. Розробка удосконаленої методики вилучення й очистки IgE людини / О. Ю. Галкін // Наукові вісті НТУУ «КПІ» : науково-технічний журнал. – 2013. – № 3(89). – С. 18–23. – Бібліогр.: 22 назви.uk
dc.identifier.urihttps://ela.kpi.ua/handle/123456789/7150
dc.language.isoukuk
dc.publisherНТУУ "КПІ"uk
dc.publisher.placeКиївuk
dc.sourceНаукові вісті НТУУ «КПІ»: науково-технічний журналuk
dc.status.pubpublisheduk
dc.subject.udc577.27:57.083.33:543.54uk
dc.titleРозробка удосконаленої методики вилучення й очистки IgE людиниuk
dc.title.alternativeDevelopment of Improved Method of Isolation and Purification of Human IgEuk
dc.title.alternativeРазработка усовершенствованной методики выделения и очистки IgE человекаuk
dc.typeArticleuk
thesis.degree.level-uk

Файли

Контейнер файлів
Зараз показуємо 1 - 1 з 1
Ескіз
Назва:
03_galkin_oy_development_of_improved.pdf
Розмір:
254.69 KB
Формат:
Adobe Portable Document Format
Завантажити
Ліцензійна угода
Зараз показуємо 1 - 1 з 1
Ескіз недоступний
Назва:
license.txt
Розмір:
1.71 KB
Формат:
Item-specific license agreed upon to submission
Опис:
Завантажити

Зібрання

Наукові вісті НТУУ «КПІ»: науково-технічний журнал, № 3(89)