Отримання рекомбінантного білка-аналога рецепторзв’язуючого домена SARS-Cov-2 з використанням білок-експресуючої системи Escherischia coli
Вантажиться...
Дата
2021
Автори
Науковий керівник
Назва журналу
Номер ISSN
Назва тому
Видавець
КПІ ім. Ігоря Сікорського.
Анотація
Магістерська дисертація містить 77 с., 14 рис., 31 табл., 82 посилання.
Пандемія коронавірусної інфекції, спричинена новим збудником SARS-
CoV-2, стрімко поширилась на всіх континентах і становить серйозну загрозу для здоров’я людей. В умовах пандемічної ситуації є важливим розробка вітчизняних діагностичних тест- систем призначених для аналізу сироватки або плазми крові на нуклеокапсидний антиген вірусу Sars-CoV-2.
Робота виконувалась на базі науково-виробичничої компанії «Діапроф- Мед».
Мета роботи - розробка технології виробництва рекомбінантного аналога білка вірусу SARS-Cov-2.
Завдання дослідження:
1) детальне ознайомлення з морфолого-фізіологічними та культуральними особливостями продуцентів, методами отримання промислових штамів;
2) дослідження впливу поживного середовища, умов культивування, концентрації хімічного індуктора на вихід високоефективної фракції білку;
3) підбір адекватної математичної моделі для опису кривих росту досліджуваного мікроорганізма;
4) відпрацювання методів очищення цільового продукту;
5) розрахування собівартості впровадження у виробництво ІФА тест- системи на основі отриманого рекомбінантного білку.
Запропоновано, в якості продуцента рекомбінантного білку, використовувати штам E. coli Rosetta (DE3) з плазмідою pET28a-GST-RBD.
Предмет дослідження: отримання високоефективної фракції рекомбінантного білку GST-RBD.
В роботі застосовані хімічні, біологічні, мікробіологічні, імунологічні, статистичні, аналітичні методи дослідження.
Наукова новизна одержаних результатів: досліджено оптимальні умови отримання розчинної фракції протеїну, поживне середовище ТВ, температура культивування – 37 оС, концентрація ІПТГ – 0,1 мМ, проведення індукції за оптичної густини – 0,3 о.о та час культивування після індукції – 4 години.
Отриманий препарат може бути використаний для створення ІФА тест- систем за для виявлення інфікування SARS-CoV-2, або для перевірки ефективності вакцинування (Індійська вакцина Сovishield спрямована на утворення антитіл до RBD антигенів). Також препарат може бути використаний у складі діагностичної системи як додатковий антиген для збільшення специфічності тестування.
За темою дисертації було опубліковано 5 наукових праць, утому числі: 1 наукова стаття та 4 тези на всеукраїнських та міжнародних конференціях.
Опис
Ключові слова
РЕКОМБІНАНТНИЙ БІЛОК, SPIKE, ВІРУС SARS-COV-2, ESCHERICHIA COLI, ROSETTA (DE3), ІПТГ, ЛОГІСТИЧНА ФУНКЦІЯ ФЕРХЮЛЬСТА, МЕТОД ІМАХ, АФІННА ХРОМАТОГРАФІЯ, АТЗТ НВК ДІАПРОФ МЕД., RECOMBINANT PROTEIN, SARS-COV-2 VIRUS, ROSETTA(DE3), IPTG, LOGISTIC FUNCTION OF FERHULST, IMAХ METHOD, AFFINITY CHROMATOGRAPHY, ATZT NVK DIAPROF MED.
Бібліографічний опис
Тітов, А. В. Отримання рекомбінантного білка-аналога рецепторзв’язуючого домена SARS-Cov-2 з використанням білок-експресуючої системи Escherischia coli : магістерська дис. : 162 Біотехнології та біоінженерія / Тітов Андрій Вадимович. – Київ, 2021. – 77 с.