Отримання рекомбінантного білка-аналога рецепторзв’язуючого домена SARS-Cov-2 з використанням білок-експресуючої системи Escherischia coli

Скорочена інформація про документ
dc.contributor.advisorДуган, О. М.
dc.contributor.authorТітов, Андрій Вадимович
dc.date.accessioned2024-04-19T04:46:06Z
dc.date.available2024-04-19T04:46:06Z
dc.date.issued2021
dc.description.abstractМагістерська дисертація містить 77 с., 14 рис., 31 табл., 82 посилання. Пандемія коронавірусної інфекції, спричинена новим збудником SARS- CoV-2, стрімко поширилась на всіх континентах і становить серйозну загрозу для здоров’я людей. В умовах пандемічної ситуації є важливим розробка вітчизняних діагностичних тест- систем призначених для аналізу сироватки або плазми крові на нуклеокапсидний антиген вірусу Sars-CoV-2. Робота виконувалась на базі науково-виробичничої компанії «Діапроф- Мед». Мета роботи - розробка технології виробництва рекомбінантного аналога білка вірусу SARS-Cov-2. Завдання дослідження: 1) детальне ознайомлення з морфолого-фізіологічними та культуральними особливостями продуцентів, методами отримання промислових штамів; 2) дослідження впливу поживного середовища, умов культивування, концентрації хімічного індуктора на вихід високоефективної фракції білку; 3) підбір адекватної математичної моделі для опису кривих росту досліджуваного мікроорганізма; 4) відпрацювання методів очищення цільового продукту; 5) розрахування собівартості впровадження у виробництво ІФА тест- системи на основі отриманого рекомбінантного білку. Запропоновано, в якості продуцента рекомбінантного білку, використовувати штам E. coli Rosetta (DE3) з плазмідою pET28a-GST-RBD. Предмет дослідження: отримання високоефективної фракції рекомбінантного білку GST-RBD. В роботі застосовані хімічні, біологічні, мікробіологічні, імунологічні, статистичні, аналітичні методи дослідження. Наукова новизна одержаних результатів: досліджено оптимальні умови отримання розчинної фракції протеїну, поживне середовище ТВ, температура культивування – 37 оС, концентрація ІПТГ – 0,1 мМ, проведення індукції за оптичної густини – 0,3 о.о та час культивування після індукції – 4 години. Отриманий препарат може бути використаний для створення ІФА тест- систем за для виявлення інфікування SARS-CoV-2, або для перевірки ефективності вакцинування (Індійська вакцина Сovishield спрямована на утворення антитіл до RBD антигенів). Також препарат може бути використаний у складі діагностичної системи як додатковий антиген для збільшення специфічності тестування. За темою дисертації було опубліковано 5 наукових праць, утому числі: 1 наукова стаття та 4 тези на всеукраїнських та міжнародних конференціях.
dc.description.abstractotherThe graduation project contains 77 pages, 14 figures, 31 tables, 82 references. The coronavirus pandemic, caused by the new SARS-CoV-2 pathogen, has spread rapidly across all continents and poses a serious threat to human health. In a pandemic situation, it is important to develop domestic diagnostic test systems designed to analyze serum or plasma for nucleocapsid antigen of Sars-CoV-2 virus. The work was performed on the basis of the research and production company "Diaprof-Med". Therefore, the aim of the work was to develop a technology for the production of a recombinant analog of the SARS-Cov-2 virus. The objectives of the research were: 1) detailed acquaintance with morphological-physiological and cultural features of producers, methods of obtaining industrial strains, 2) study of the influence of nutrient medium, cultivation conditions, concentration of chemical inducer on the yield of highly efficient protein fraction; 3) selection of an adequate mathematical model to describe the growth curves of the studied microorganism; 4) development of methods of purification of the target product; 5) calculation of the cost of introduction into production of ELISA test system on the basis of the received recombinant protein. It is proposed to use as a producer of recombinant protein strain of E. coli Rosetta (DE3) with plasmid: pET28a-GST-RBD. Subject of research: obtaining a highly efficient fraction of recombinant GST-RBD protein. Research methods are used in the work: chemical, biological, microbiological, immunological, statistical, analytical methods. Scientific novelty of the obtained results: the optimal conditions for obtaining the soluble fraction of protein, nutrient medium TB, cultivation temperature - 37 oC, IPTG concentration - 0.1 mM, induction at optical density - 0.3 o.d. and cultivation time after induction - 4 hours. The resulting drug can be used to create ELISA test-systems for the detection of SARS-CoV-2 infection, or to test the effectiveness of vaccination (Indian vaccine Covishield aims to form antibodies to RBD antigens). The drug can also be used in the diagnostic system as an additional antigen to increase the specificity of testing. On the topic of the dissertation was published 5 scientific papers, including: 1 scientific article and 4 abstracts at national and international conferences.
dc.format.extent77 с.
dc.identifier.citationТітов, А. В. Отримання рекомбінантного білка-аналога рецепторзв’язуючого домена SARS-Cov-2 з використанням білок-експресуючої системи Escherischia coli : магістерська дис. : 162 Біотехнології та біоінженерія / Тітов Андрій Вадимович. – Київ, 2021. – 77 с.
dc.identifier.urihttps://ela.kpi.ua/handle/123456789/66348
dc.language.isouk
dc.publisherКПІ ім. Ігоря Сікорського.
dc.publisher.placeКиїв
dc.subjectРЕКОМБІНАНТНИЙ БІЛОК
dc.subjectSPIKE
dc.subjectВІРУС SARS-COV-2
dc.subjectESCHERICHIA COLI
dc.subjectROSETTA (DE3)
dc.subjectІПТГ
dc.subjectЛОГІСТИЧНА ФУНКЦІЯ ФЕРХЮЛЬСТА
dc.subjectМЕТОД ІМАХ
dc.subjectАФІННА ХРОМАТОГРАФІЯ
dc.subjectАТЗТ НВК ДІАПРОФ МЕД.
dc.subjectRECOMBINANT PROTEIN
dc.subjectSARS-COV-2 VIRUS
dc.subjectROSETTA(DE3)
dc.subjectIPTG
dc.subjectLOGISTIC FUNCTION OF FERHULST
dc.subjectIMAХ METHOD
dc.subjectAFFINITY CHROMATOGRAPHY
dc.subjectATZT NVK DIAPROF MED.
dc.subject.udc579.61
dc.titleОтримання рекомбінантного білка-аналога рецепторзв’язуючого домена SARS-Cov-2 з використанням білок-експресуючої системи Escherischia coli
dc.typeMaster Thesis

Файли

Контейнер файлів
Зараз показуємо 1 - 1 з 1
Ескіз
Назва:
Titov_magistr.pdf
Розмір:
1.76 MB
Формат:
Adobe Portable Document Format
Завантажити
Ліцензійна угода
Зараз показуємо 1 - 1 з 1
Ескіз недоступний
Назва:
license.txt
Розмір:
8.98 KB
Формат:
Item-specific license agreed upon to submission
Опис:
Завантажити

Зібрання

Магістерські роботи (ПБТБ)
Магістерські роботи